一种粉叶金花组织培养快速繁殖方法与流程

发布者:admin 发布时间:2019-10-20 22:46 浏览次数:

  本发明涉及植物组织培养的技术领域,特别是指一种粉叶金花组织培养快速繁殖方法。

  粉叶金花,学名Mussaenda hybrida cv.Alicia,别名粉萼花、粉纸扇,原产热带非洲、亚洲,属茜草科植物。株高1~2米,生性强健,喜高温,耐旱。萼片肥大,盛开时满株粉红色,非常醒目,花期夏至秋冬。多年来只在野外或热带、亚热带植物园中有栽培,随着近年来园林绿化的兴起,粉叶金花具有叶色翠绿、生长快速、花姿美、花期长适应性强;适宜盆栽、花槽栽植、单植、列植、或群植于庭院中的种种特点越来越得到人们的喜爱。是南方夏季的莳花之一,也是造园添景的理想灌木。同属的还有红叶金花、玉叶金花,株型类似,花色不同。传统的繁殖方法为扦插繁殖,扦插时间通常在2月底3月初,因粉叶金花在冬季与春季交接时间段不开花并准备萌发新芽,这是繁殖最佳时间。所以扦插繁殖不仅受季节气候的影响,其产量也难以满足日益增长的园林绿化造景需求。通过植物组织培养技术可以很好的解决这一问题,但是由于长期得不到重视,导致这一优良的造景植物在各个方面的研究都比较滞后,所以本发明通过植物培养方法,工业化生产优良种苗以填补此方面研究的空白。

  本发明的目的在于提供一种粉叶金花组织培养快速繁殖方法,填补粉叶金花组织培养方面研究的空白,解决传统粉叶金花扦插繁殖增殖率低,繁殖周期长及成本高等问题,实现粉叶金花工业化快速繁育。

  步骤A、不定芽诱导:采取健壮粉叶金花当年生带有腋芽的茎段作为外植体,先对外植体进行清洗、消毒,接入不定芽诱导培养基中培养,光照强度1500-2000Lux,光照时间10h/d,温度23±2℃,培养20-30天;

  步骤B、增殖培养:将步骤A诱导出的不定芽切下后,接入增殖培养基中进增殖培养,培养条件为温度为23±2℃,光照10h/d,培养周期40天;

  步骤C、壮苗生根培养:将步骤B增殖后的芽体分株切下,然后接种于壮苗生根培养基中,培养周期60天。

  进一步,步骤A中外植体的清洗、消毒方法为:将采集的幼嫩枝条用家用清水清洗后用洗衣粉饱和澄清液浸泡12h,冲洗干净后转移至超净工作台中用75%的酒精溶液清洗10s,清洗过程中轻微摇晃使外植体充分与酒精溶液接触,然后用无菌蒸馏水冲洗5遍,再用10%次氯酸钠溶液清洗8min,无菌蒸馏水冲洗3遍,最后用0.1%升汞溶液再清洗8min,无菌蒸馏水冲洗5遍,沥干水分备用。

  采用上述结构后,本发明可以在一个周期120-130天内使粉叶金花幼苗扩大4-5倍,较传统的扦插繁殖时间缩短一半以上,且不受季节、气候及用地方面的条件限制,且苗木质量优良,数量充足,可以快速满足市场对园林造景绿化的需求。

  为了进一步解释本发明的技术方案,下面通过具体实施例来对本发明进行详细阐述。

  选取健壮无病虫害的母株作为外植体来源,裁剪带腋芽的嫩枝条清洗干净后,用饱和洗衣粉澄清液浸泡12h,洗净后转移至超净工作台,用75%的酒精溶液清洗10s,清洗过程中轻微摇晃使外植体充分与酒精溶液接触,然后用无菌蒸馏水冲洗5遍,再用10%次氯酸钠溶液清洗8min,无菌蒸馏水冲洗3遍,最后用0.1%升汞溶液再清洗8min,无菌蒸馏水冲洗5遍,沥干水分后将外植体裁剪成1cm左右带腋芽的茎段,平铺接种于培养基表面,稍微轻压使外植体稍稍浸入培养基。不同灭菌方式的效果对比如下表1所示。

  将消毒后的外植体裁剪去头尾切口,然后将外植体裁剪成1cm左右的茎段,平铺接种于不定芽诱导培养基,稍微轻压使茎段稍稍浸入培养基中,其中不定芽诱导培养基包含改良后的MS基本培养基、6-BA0.8-1.0mg/L、NAA0.1-0.3mg/L、蔗糖30g/L、PH5.6-5.8,光强2000Lux,光照时间10h/d,温度23±2℃,培养30天,一株外植体可诱导出1-2颗不定芽。不同基本培养基对不定芽诱导的影响如下表2所示;不同激素组合度不定芽诱导的影响如下表3所示。

  有表2可见经过改良后的MS基本培养基,使盐含量相对降低,符合外植体培养的环境条件,可以维持外植体与培养基的内外渗透压平衡,培养过程中外植体不易失水死亡,玻璃化现象也较少。

  由表3可以看出在不定芽诱导中,6-BA可以起到较好的作用,通过与NAA的搭配使用可以很好的用于粉叶金花茎段不定芽的诱导。

  将诱导出的不定芽从外植体根部裁剪后接种于增殖培养基中,其中增殖培养基包含改良后的MS基本培养基、6-BA 0.3-0.5mg/L、NAA0.1-0.3mg/L、蔗糖20g/L、PH5.6-5.8。光强2000Lux,光照时间10h/d,温度23±2℃,培养40天,增值率倍率可达到4-5倍。不同基本培养基对不定芽增殖的影响如下表4所示;不同激素用量对增值倍率的影响如下表5所示。

  由表4可知不同的基本培养基对不定芽增殖的影响较明显。其中使用改良后的基本培养基较适合粉叶金花的不定芽增殖培养,经过30-40天的培养,增殖倍率可达到4-5倍。

  将增殖后的芽体分株后接种于壮苗生根培养基中,其中壮苗生根培养基包含改良后的MS基本培养基、ABT(生根粉)0.1-0.3mg/L、香蕉50g/L、AG(活性炭)1g/L,PH5.6-5.8。光强2000Lux,光照时间10h/d,温度23±2℃,培养2.5-3个月,高度可达到6-7cm,株径3-4mm,可达到根须数4-6根。不同激素对芽体壮苗生根的影响如下表6所示;不同基本培养基对壮苗生根的影响如下表7所示;不同有机添加物对芽体壮苗生根的影响如下表8所示。

  由表6可以看出在壮苗生根的阶段使用改良MS培养基作为壮苗生根的基本培养基,可以有效的达到壮苗生根的目的。

  由表7可以看出,在粉叶金花壮苗生根培养的过程中添加生根粉比传统的NAA更有效,前者根系不仅较发达,长度较长而且粗壮程度也较后者有较大的提高。

  由表8可以看出合适的有机添加物对粉叶金花壮苗具有较好的效果,通过添加不同的有机物发现,合适香蕉用量作为壮苗生根培养的有机添加物对粉叶金花壮苗的效果较好,可以有效的节省壮苗时间,通过搭配合适的激素配比,可以使壮苗与生根同时进行,不仅大大的缩减了培养时间也可使后期的炼苗移栽具有较好的成活率。

  本发明可以在一个周期120-130天内使粉叶金花幼苗扩大4-5倍,较传统的扦插繁殖时间缩短一半以上,且不受季节、气候及用地方面的条件限制,且苗木质量优良,数量充足,可以快速满足市场对园林造景绿化的需求。

  上述实施例并非限定本发明的产品形态和式样,任何所属技术领域的普通技术人员对其所做的适当变化或修饰,皆应视为不脱离本发明的专利范畴。


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